{"created":"2025-04-01T05:19:25.723253+00:00","id":2000158,"links":{},"metadata":{"_buckets":{"deposit":"71e3a2ed-422c-48a2-939d-26c1a706d37c"},"_deposit":{"created_by":5,"id":"2000158","owner":"5","owners":[5],"pid":{"revision_id":0,"type":"depid","value":"2000158"},"status":"published"},"_oai":{"id":"oai:hju.repo.nii.ac.jp:02000158","sets":["1747705089129:1707807609018:1743483761363"]},"author_link":[],"control_number":"2000158","item_10002_biblio_info_7":{"attribute_name":"bibliographic_information","attribute_value_mlt":[{"bibliographicIssueDates":{"bibliographicIssueDate":"2025-03-18","bibliographicIssueDateType":"Issued"},"bibliographicIssueNumber":"2","bibliographicPageEnd":"32","bibliographicPageStart":"1","bibliographic_titles":[{"bibliographic_title":"広島女学院大学大学院論叢","bibliographic_titleLang":"ja"},{"bibliographic_title":"Journal of Hiroshima Jogakuin University  Graduate 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シグナルとp53シグナルは互いに抑制しあう関係にあり，NF-κBのRelAとがん抑制タンパク質p53が核内でヒストンアセチル化酵素（CBP）を取り合うことにより，転写活性が制御されていることが報告されている。しかし，p53によるNF-κBの詳細な制御機構は解明されていない。\n　先行研究から，転写活性非依存的にRelAの転写活性化ドメイン（TAD）がIKKβの活性化を抑制し，NF-κBシグナル経路を負に制御していることが示唆された。多くの転写因子の構造にはTAD領域があり，p53にも保存されていることが構造解析プログラムから予想された。そこで本実験では，p53のTAD領域に着目し，p53によるNF-κBの新たな抑制機構について解析を行った。\n【方法】\n　ルシフェラーゼアッセイをGP2-293細胞（アデノウイルス5型DNAで形質転換したヒト胎児腎細胞）にF-vector（遺伝子なし），Flag-p53 WT，p53点変異体【Flag-p53LLL/AAA】， p53欠損変異体【Flag-p53（1-101），Flag-p53（102-292），Flag-p53（293-393）】，RelA 欠損変異体【Flag-RelA（286-551）】，CBPのプラスミドと，NF-κBが結合する塩基配列とルシフェラーゼ遺伝子の配列を持つpNF-κB Luc のルシフェラーゼプラスミドをトランスフェクション法で細胞内へ導入し，24時間培養後，細胞の可溶化液を回収した。ルシフェラーゼを発現した細胞可溶化液とルシフェラーゼの基質であるルシフェリンと反応させて化学発光を起こし，発光量を測定することで，NF-κBの活性化を定量した。\n　GP2-293細胞にF-vector（遺伝子なし），p53点変異体（LLL/AAA）， Flag-RelA（286-551）をトランスフェクション法で細胞内に導入し，24時間培養後，タンパク質抽出液を回収した。SDS-PAGEによりタンパク質を分離し，リン酸化IKKβ抗体（P-IKKβ（ser176/ser180）），Flag抗体，HA抗体，actin 抗体を用いてウエスタンブロッティング法により目的のタンパク質を検出した。\n【結果および考察】\n　TNFα刺激によりNF-κBの活性化が誘導される条件下において，p53 WTを発現させるとNF-κBの活性化が抑制されることが確認された。さらに，【p53（1-101）：転写活性化領域（TAD）】，【 p53（102-292）：DNA結合領域（DBD）】，【 p53（293-393）：四量体形成領域（TD）と塩基性領域（BD）】の3つの領域で比較するとNF-κBの転写活性はp53-TADにより最も抑制されることが判明した。ウエスタンブロッティング法でIKKβのリン酸化（P-IKKβ）を解析したところ，p53 WT，p53-TADによりP-IKKβの量が抑制されていることが確認された。これらのことから，p53はTADを介してIKKβのリン酸化が抑制され，NF-κBの活性化を負に制御していることが示唆された。\n先行研究からRelAのLxxLLモチーフがIKKβのリン酸化を抑制していることが明らかとなっており，p53のTAD領域においてもLxxLLモチーフが保存されている。よって，p53のTADに保存されているLxxLLモチーフがIKKβのリン酸化を抑制し，NF-κBの活性化を抑制することが示唆された。実際に，p53のLxxLLモチーフにおける点変異体はNF-κBの活性抑制効果がわずかに減弱することが確認された。\n　核内での経路は関与していないことが示唆されたことから，細胞質における制御に着目し，NF-κB活性化経路の上流であるIKKβの脱リン酸化酵素の関与について解析を行なった。脱リン酸化阻害剤であるオカダ酸を添加して，PP2Aの関与について解析を行なったところ，オカダ酸処理によりp53-TAD の抑制効果が減弱することが明らかとなった。このことから，このことから，p53-TADが脱リン酸化酵素と協調してP-IKKβを負に抑制することが示唆された。","subitem_description_type":"Abstract"}]},"item_10002_publisher_8":{"attribute_name":"出版者","attribute_value_mlt":[{"subitem_publisher":"広島女学院大学大学院"}]},"item_10002_source_id_9":{"attribute_name":"ISSN","attribute_value_mlt":[{"subitem_source_identifier":"2759-2952","subitem_source_identifier_type":"EISSN"}]},"item_10002_version_type_20":{"attribute_name":"出版タイプ","attribute_value_mlt":[{"subitem_version_resource":"http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85","subitem_version_type":"VoR"}]},"item_creator":{"attribute_name":"著者","attribute_type":"creator","attribute_value_mlt":[{"creatorNames":[{"creatorName":"笠井, 理恵子","creatorNameLang":"ja"},{"creatorName":"カサイ, リエコ","creatorNameLang":"ja-Kana"},{"creatorName":"Kasai, Rieko","creatorNameLang":"en"}]},{"creatorNames":[{"creatorName":"土谷, 佳弘","creatorNameLang":"ja"},{"creatorName":"ツチヤ, ヨシヒロ","creatorNameLang":"ja-Kana"},{"creatorName":"Tsuchiya, 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